Можно ли автоклавировать растворы соды?

jurius

Что будет с Na2CO3 и NaHCO3 при автоклавировании? :)

karim

если в закрытой банке то ничего :confused:

mtk79

ну, вторая в первую перейдет (версия).
ПС. Модельно изучаете разрыхляющее действие аммиачных карбонатов, используемых в разрыхлителе теста?

karim

попробуй померить рН до и после :)

jurius

в закрытой, конечно :)
Вот что нашла:
Г и д р о к а р б о н а т (питьевая, или пищевая, сода) NaHCO3-бесцв. кристаллы; разлагается при 100-150 °С

:shocked:

jurius

ну, какие еще будут версии? :)

karim

а нах оно тебе надо?
бактериальные фильтры не катят?

jurius

РНКаз боюсь :)

karim

молекулярко ацтой и занудно :p

jurius

но и это не отменит разложения гидрокарбоната :(

sidorskys

Думаешь, они в соли попадаются?

jurius

Именно. Воду-то контролировать я могу...

sidorskys

Бери тогда марки Molecular Biology grade или RNAse free. :grin:
А на автоклавирование забей, оно всё-равно строго говоря не поможет:
Because RNase cannot be removed by autoclaving, solutions that are contaminated, or are suspected of being so, must be discarded.

Собственно, насколько помню, РНКазу, свободную от ДНКазы, готовят кипячением препарата РНКазы.
HOW TO WIN THE BATTLE WITH RNASE
Many an experiment has been needlessly ruined by contamination with RNase. However, problems with exogenous RNase can be entirely avoided by vigilant use of prophylactic measures and the prudent application of common sense. In our experience, contamination with exogenous RNase most frequently arises from two sources:
• Contaminated buffers: By careless use of aseptic technique, buffers have become contaminated with bacteria or other microorganisms. The growth of these microorganisms is not usually visible to the naked eye and need not be florid to cause problems. Because RNase cannot be removed by autoclaving, solutions that are contaminated, or are suspected of being so, must be discarded.
• Automatic pipetting devices: There is simply no point in using disposable pipette tips that are free of RNase if the automatic pipettor has been used previously to dispense solutions containing RNase, for example, during processing of small-scale plasmid preparations or, even worse, in ribonuclease protection assays. If the barrel or the metal ejector of the automatic pipettor comes in contact with the sides of tubes, it becomes a very efficient vector for the dissemination of RNase.
A mantric belief in the power of rubber gloves to ward off problems with RNase has taken root in many laboratories. In truth, however, snapping on a pair or two of rubber gloves is about as useful as carrying a rabbit's foot. First, the hair or beards of investigators are more likely to be the culprits than the hands, and more significantly, gloves can only provide protection until they touch a surface that has been in contact with skin. To be of any use at all, gloves must be changed every time a piece of apparatus is touched, a refrigerator opened, an ice-bucket filled, an entry written in a laboratory notebook, a reagent measured. This is neither wise nor practicable. Wear gloves, but do not believe that they offer protection against RNase. More sensible measures include the following:
• Keep a special set of automatic pipettors for use when handling RNA.
• Set aside items of glassware, batches of plasticware, and buffers that are to be used only for experiments with RNA.
• Store solution/buffers in small aliquots and discard each aliquot after use. Avoid materials or stock solutions that have been used for any other purposes in the laboratory.
• Set aside special electrophoresis devices for use in the separation of RNA. Clean these devices with detergent solution, rinse in H2O, dry with ethanol, and then fill with a 3% solution of H2O2. After 10 minutes at room temperature, rinse the electrophoresis tank thoroughly with H2O that has been treated with DEPC (please see the information panel on DIETHYLPYROCARBONATE).
• Prepare all solutions and buffers with RNase-free glassware, DEPC-treated water, and chemicals reserved for work with RNA that are handled with disposable spatulas or dispensed by tapping the bottle rather than using a spatula. Wherever possible, treat solutions with 0.1% DEPC for at least 1 hour at 37°C and then autoclave for 15 minutes at 15 psi A.05 kg/cm2) on liquid cycle.
• Autoclaving glassware and plasticware may not be sufficient to inactivate RNase. Bake glassware for 4 hours at 300°C. Treat plasticware either with DEPC or commercially available products that inactivate RNase upon contact (e.g., RNaseZap from Ambion Inc.).
• Use disposable tips and microfuge tubes certified by a reputable manufacturer to be free of RNase. To reduce the chances of contamination, it is best to use sterile forceps when transferring these small items from their original packages to laboratory racks.
• Use inhibitors to suppress RNases during the isolation of RNA (please see the information panel on INHIBITORS OF RNases).

jurius

RNase cannot be removed by autoclaving
Но я после обработки DEPCом автоклавирую, и так она может быть побеждена.
Спасибо за советы.

Andrey68

жуть какая, DEPC + автоклав имхо перебор
уверена, что проблема именно в соли, а не в сэмплерах и типах, например, или в пробирку кто-нить плюнул?

sunlya

Я бы скорее посоветовала промыть сэмплеры, заменить в них фильтры, использовать типы с фильтрами, эппендорфы РНКаза-фри. Этого и элементарного поддержания рабочего места в чистоте обычно хватает. С солями вообще обычно мало заморачивались

Andrey68

а DEPC вы используете? мы вот нет, и никаких проблем с РНКазами пока, тьфу-тьфу, не было

sunlya

А для чего? Если только вода безРНКазная заканчивается, и купить срочно нельзя, то да - есть запас DEPC воды. А так - на этапе выделения РНК буфер антиРНКазный сам по себе, затем спирты - тоже не самая благоприятная для них вещь. Вот при подготовке пробы к РТ, когда растворять её нужно в воде - РНКаза-фри вода (остатки DEPC в этаноле нехило могут гнобить ревертазу). Растворили, отобрали пробу, добавили в неё ингибитор - и сразу обратно в спирт и в холодильник. При гибридзации - там речь уже о таких количествах РНК идёт, что РНКазы просто количественно уже не страшны :)
А нет, вру - для практикума на всякий случай подготовила что-то вроде 50 мл DEPC воды - но это уже перестраховка от студентов. Ею обработали все семплеры, столы и т.д. Но это была просто страховка от неумелости
Оставить комментарий
Имя или ник:
Комментарий: