Принципиальные различия между силикагелями C16 и С18

730097427190

есть ли принципиальные различия между силикагелями C16 и С18?
теория не нужна, нужны примеры из личного опыта!
заранее сэнкс!

strelok69

а бывают C16 колонки?
спроси вот здесь например

730097427190

бывают
С8, С16, С18
спасибо за совет!

strelok69

я видел только C8 C18 и C30

730097427190

у меня требуют провести анализ на С16, а в наличии только колонка С18.
Если нет опыта (как у меня очевидно, что существенного отличия в таких колонках быть не должно, тк длина ув цепи отличивается всего на 2 звена, т.е. на ок. 5 ангстремов.
(анализирую антибиотик внушительных размеров, адсорбция по механизму растворения в привитом слое весьма маловероятна)
Вышел небольшой спор, вот я и хочу выяснить. Если есть работавшие на обеих колонках, может, могут сказать чем они отличаются на практике...

strelok69

имхо от приготовления элюента сильнее будет зависеть
зы
я не аналитик, а энзимолог если чо
но с ВЖЭХ на C18 знаком не понаслышке

730097427190

если энзимолог, то не меньше знаком, чем аналитик
ну скажем элюент у нас по проекту нормативного документа "зафиксирован" - смесь ацетонитрила и фосфатного буфера. но с колонки С18 он не вымывает ничего! просто сколько ни вводишь антибиотика - весь оседает на колонке, а вместо хроматографических пиков - частокол (нормальный человек в такой ситуации подбирает элюент конечно).
В итоге я провела анализ на смеси метанол-вода, а заказчик заявил что вся беда в том, что колонка не та, что указана в методике. А имхо методика кривая и требует доработки... Но эта идея человеку ессно не понравилась

strelok69

могу сказать только
врядли укорачивание цепи на 2 группы позволит нормально провести анализ с тем же элюэнтом
ещё такой вопрос:
ацетонитрилом не смылось, а метанолом запросто? хм...
насколько у вас элюент "зафиксирован"? соотношение ацн:буфер можно менять?
налей побольше ацетонитрила, только не забудь pH довести (если конечно не насос смешивает)

730097427190

да, я сначала так и сделала.
когда выяснилось, что смесь с 90% ацетонитрила ничего не смывает, я добавила тетрагидрофурана. это мало помогло ситуёвине.
а метанол все смыл (с водой пополам).
врядли укорачивание цепи на 2 группы позволит нормально провести анализ с тем же элюэнтом

я тоже так думала, вот посоветоваться хочу
спасиб, мнение энзимолога учтено!

strelok69

смесь с 90% ацетонитрила них не смывает

колонку убить можно
pH конечного элюента проверяла?
а то есть такая мысля, что метанол из-за своей константы диссоциации близкой к воде гораздо слабее ацетонитрила влияет на это дело
а если буфер фосатный по методике и среда по идее должна быть кислая, то депротонирование всевозможных аминогрупп ситуацию с вымыванием только усугубляет
кстати что за антибиотик, если не секрет?

730097427190

колонка это дело выдерживает, не боись! проверено
рН контролировала, тк это указано по методике.
конечный элюент был подкислен (метанольный р-р) до рН=3,0, по методике фосф буфер - рН 6,5.
антибиотик не секретный: эремомицин в форме сульфата.

strelok69

а элюент с ацетонитрилом был подкислен?
нашёл структуру, посмотрел...
ой, мама!
пептид, сахара, аминогруппы...
смываться с C18 должно хорошо по идее
никакого SDS в буфере нет случаем?

730097427190

SDS
кого? в смысле, чего?
структура конечно ОГО, зато можно наверняка исключить растворение в привитой фазе
буфер был почти нейтральный (в смеси с ацетонитрилом как было в методике указано. содержание ацетонитрила варьировала от 10 до 90%.

strelok69

буфер был почти нейтральный (в смеси с ацетонитрилом)
ну вот он и сел на фазу
подкислишь до 3-х - слетит со свистом
кто методику писал? убить мало
это ж надо додуматься такую дуру с тремя аминогруппами в нейтральной среде гонять
тут имхо от органического компонента зависит слабо
SDS = sodium dodecyl sulfate
раз не знаешь, значит нету
это я так, на всякий случай спросил

730097427190

кто методику писал? убить мало
у меня те же эмоции
Оставить комментарий
Имя или ник:
Комментарий: